Deel C
Bovendien ontving 1 UNC-CH-hond (O20) een onbedoelde subtherapeutische dosis van dezelfde vector ( Figuur 1C ; aanvullende Figuur 5C). Dit resulteerde in FIX-antigeenniveaus onder de detectiegrens (~ 0,3%), maar aanhoudende FIX-activiteit van ~ 1% normaal. Voordat hij 1% FIX-activiteit bereikte, had O20 14 bloedingen in 15 maanden, maar vervolgens bloedde hij niet (31 maanden observatie). De complete verbetering van het ozonbloedingfenotype met 1% activiteit toont de in vivo hemostatische werkzaamheid van FIX-Padua aan. Ondanks lage antigeenniveaus, ontwikkelde O20 geen antilichamen tegen cFIX, zelfs na meerdere toedieningen van hondenplasma (met cFIX-WT) om bloedingen te behandelen. We daagden ook 2 UNC-CH-honden uit die cFIX-Padua tot expressie brachten uit skeletspier 12 met rcFIX-WT> 8 jaar na AAV-afgifte (supplementair Figuur 6). Opnieuw was er geen detecteerbare anti-cFIX immuunrespons. Deze resultaten suggereren dat zelfs minimale niveaus van ononderbroken antigeenexpressie die wordt verschaft door gentherapie voldoende zijn voor aanhoudende immuuntolerantie. De mogelijke bezorgdheid over de veiligheid dat lage antigeenniveaus de vorming van FIX-remmers in muizen 23 veroorzaken, wordt niet ondersteund door onze gegevens in opvallende modellen.
Gecombineerd, deze gegevens verkleinen de kloof tussen lever- en skeletspier AAV gentherapie, in termen van werkzaamheid, door langdurige expressie van curatieve niveaus van FIX-Padua aan te tonen, en in termen van veiligheid, omdat er geen verhoogde immunogeniciteit is bij uitdagingen. Bovendien is de intravasculaire toedieningsmethode al veilig gebleken bij proefpersonen met spierdystrofie die alleen zoutoplossing 24 ontvingen en verwacht wordt dat ze een veiliger profiel hebben bij HB-proefpersonen met gezond spierweefsel. Intravasculaire afgifte van AAV aan skeletspier kan ook het remmende effect van NAb op vector-capside overwinnen, zoals aangetoond in preklinische modellen over vectorherziening en profylactische plasmaferese. 10 , 25 Samen vormen deze gegevens de basis voor translationele studies voor spiergerichte expressie van FIX-Padua bij patiënten met iatrogene leverziekte met een breed bereik van onderliggende F9- mutaties.
Dankwoord
De auteurs danken Nicholas Martin, Benjamin J. Lee en Robert J. Davidson voor technische assistentie en de onderzoeksvectoren van het Raymond G. Perelman Centrum voor Cellulaire en Moleculaire Therapeutica.
Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health, National Heart, Lung en Blood Institute verleent P01 HL64190 project 1 (VRA), HL086944 (CDL) en 5R24HL063098 (TCN).
Auteurschap
Bijdrage: RAF heeft de experimenten van de beoordeling van het fenotype uitgevoerd; BJS-J. genereerde de recombinante hondseiwitten en hielp bij het opstellen van het manuscript; GPN en CDL voerden de vectortoediening uit en verzorgden de dieren van de Universiteit van Alabama in Birmingham; EPM en TCN voerden de vectortoediening uit en verzorgden de dieren van de Universiteit van North Carolina in Chapel Hill en eiwituitdagingen voor alle honden; en VRA leidde experimenteel ontwerp, uitgevoerde data-analyse en interpretatie en stelde het manuscript op.
Belangenverstrengeling: de auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen.
Correspondentie: Valder R. Arruda, Children's Hospital of Philadelphia, 3501 Civic Center Blvd, 5056 Colket Translationeel Onderzoekscentrum, Philadelphia, PA 19104; arruda @ email.chop.edu .